Roztlaky - slinné žlázy

1. Roztlaky - slinné žlázy

Barvení orceinem

Izolace a pozorování polytenních chromozómů (ze slinných žláz larev pakomárů

Izolace a pozorování polytenních chromozómů (ze slinných žláz larev pakomárů)

Pracovní postup:

1) 3 patentky (larvy pakomárů) v malé kapce vody na podložním skle přeneseme pod

preparační mikroskop.

2) Pomocí ostré pinzety a (zahnuté) preparační jehly odtrhneme larvám hlavy. V případě, že slinné žlázy zůstanou uvnitř hrudního oddílu těla, je třeba je vymáčknout ven.

3) Těla larev odstraníme a na preparát přikápneme 1 kapku aceto-orceinu a necháme jej 5-10 minut působit.

4) odsajeme filtračním papírkem aceto-orcein a kápneme laktoacetát

5) Přiložíme krycí sklíčko a opatrně roztlačíme (obarvený roztlakový preparát).

6) Podložní sklo zahřejeme mírně nad plamenem kahanu.

Spermie

Je-li více než 60 % spermií imotilních, je vhodné stanovit proporci živých spermií pomocí supravitálních barvení. Mrtvé buňky s poškozenou plazmatickou membránou přijímají barvivo. Používá se buď eozin na mokrém preparátu, nebo kombinace eozinu a negrozinu na suchém preparátu. Hodnotí se 100 spermií, živé jsou nezbarvené, mrtvé zbarvené. Supravitální barvící techniky umožňují odlišit živé, ale imotilní spermie od mrtvých. Metoda je kontrolou přesnosti hodnocení motility, protože procento živých spermií má mírně převyšovat počet pohyblivých spermií. Větší zastoupení živých, ale nepohyblivých spermií ukazuje na strukturální defekty bičíků spermií.

Více zde: http://www.cssmweb.cz/news/spermiologicke-vysetreni/

Barvení pouze eosinem

Tato metoda je velmi jednoduchá a rychlá, nevýhodou je, že připravený vlhký preparát nelze uchovat pro případnou opakovanou kontrolu.

Připraví se směs 5 μl ejakulátu a 5 μl roztoku eosinu a dobře se promíchá.

Kapka takto vzniklé směsi se přenese na čisté podložní sklíčko a překryje se krycím sklíčkem o rozměrech 22 × 22 mm. Hodnocení se provádí pod světelným mikroskopem při celkovém zvětšení 200× nebo 400×. Živé spermie mají bílou nebo slabě růžovou hlavičku, mrtvé spermie jsou tmavě růžové nebo červené.