Roztlaky a otisky
Upraveno dle Mgr. Zbyněk Houdek
1. Roztlaky
Jednoduché a rychlé provedení:
Tkáň přitlačíme na podložní sklo tím buněčnou tkáň rozvolníme.
Sledování mitóz v b. jádrech (slinné žlázy pakomára s pentlicovitými ch., varlata hmyzu a dělivá pletiva rostlin (kořenové špičky).
Polytenní chromozomy – mnohovláknové chromozomy, které vznikají v případě, že po replikaci DNA řetězců nenásleduje buněčné dělení.
Jsou tvořeny mnohočetným svazkem kolineárních vláken DNA spojených v oblasti centroméry.
Vyskytují se zejména v buňkách slinných žláz larev dvoukřídlého hmyzu Drosophila melanogaster. Srovnání barvitelných a nebarvitelných zón, které lze pozorovat světelným mikroskopem v podobě pruhů, umožňuje studium chromozomálních abnormalit.
Vznikají proto, aby se zvýšením počtu kopií genů na nich se nacházejících urychlil proces transkripce a translace a tím pádem i zvýšila produkce žlázy.
Barvení roztlaků
Acetobarviva – barviva rozpustná v kys. octové (acetoorcein- 0,5 %, acetokarmín).
Při vyšších teplotách a bez fixace (fixuje CH3COOH).
Acetoorcein (1 %): 100 ml ledové CH3COOH + 2 g orceinu, mírně povaříme pod zpětným chladičem + 100 ml d. H2O, zfiltrujeme.
Acetokarmín (1 %): 45 ml ledové CH3COOH + 55 ml d. H2O + 4 g karmínu, vaříme 30-60 min., zfiltrujeme.
Roztlak meristému kořínků Allium cepa
Otisky
Čerstvá vypreparovaná tkáň:
Játra, plíce, slezina, kostní dřeň.
Skalpelem odřízneme fragment tkáně a uchopíme pinzetou a řeznou plochu lehce přiložíme na podložní sklo - otisk – necháme krátce zaschnout.
Řezové preparáty
Cytologické a histologické preparáty
Tenké a průhledné řezy (m)
Barvení
Řezání
Žiletkou – rostlinný materiál
Mikrotomy – ruční m. (0,05 mm)
Ruční svorkový m.