Nátěry (roztěry)

dle: Mgr. Zbyněk Houdek

Volné buňky – základní hematologická m.

Různé organely

Prvoci, spermie, tělní tekutiny, parazité

Tenká vrstva jednotlivých buněk

Suché roztěry – rychlé vyschnutí - min. poškození

Nátěry neuzavíráme do kanadského balzámu, ale pozorujeme pod mikroskopem pomocí imerzního oleje.

Příprava skel

Dokonale čistá (odmaštěná) skla

Podložní skla: 

benzin  

var 30 min. v roztoku saponátu 

H2O lépe d. H2O  

96 % ethanol (skladujeme)

Suché nátěry

Prvoci v nálevu, tkáňové bb., ektoparazité ryb, spermie:

Vzorek naneseme pinzetou na podložní sklo a jehlou rozetřeme.

Fixace – 10 min. parami formaldehydu, dofixujeme 3 min. methanolem.

Po zaschnutí nakápneme Geimsův roz. (2 kapky barviva + 1 ml H2O – 1-2 hod.

Oplach d. H2O.

Po zaschnutí pozorujeme pod imerzním objektivem.

Vlhké nátěry

Vzorek + kapka krevního séra (přilne lépe ke sklu) - podložní sklo - rozetřeme na krycí sklo

Fixace v Petriho M nátěrem dolů (min.) – např. sublimát-alkohol, Bouin-Hollandova, Schaudinova fixáž, pak obrátíme a sklíčko ponoříme na dno PM (30 min.).

Vypíráme opakovaně v 80 % alkoholu s jod. tinkturou a následně d. H2O.

Barvení Heidenhaimovým železitým hematoxylinem (6 hod.).

Odvodníme vzestupnou alkoholovou řadou (5 min. v lázni) - xylen.

Podložní sklo – kanadský balzám – krycí sklo s roztěrem.

Krevní roztěr

Na kraj podložního sklíčka kápneme přiměřeně velkou kapku krve, přibližně 0,5 - 1 cm od okraje. 

Roztěrové sklíčko přiložíme jakoby před kapku (pokud je na pravém okraji, tak sklíčko přikládáme z levé strany kapky) a posuneme ho ke kapce, až se celá rozlije podél hrany roztěrového sklíčka.

Sklíčkem roztíráme krev rovnoměrným, plynulým pohybem v postupně více ostrém úhlu od 45° do 30°. Čím je úhel ostřejší (a kratší doba roztěru), tím je nátěr tenčí.

May-Grünwaldovo barvení

Opatrně přikapáváme destilovanou vodu tak, aby se původní barvivo nesmylo. Cílem je nechat působit takto naředěné barvivo (1:1) další 5-10 min.

Barvivo slijeme, opláchneme d. H2O.

Po zaschnutí pozorujeme pod imerzním objektivem s imerzním olejem.

Krevní nátěr na 3 minuty pokryjeme May-Grünwaldovým barvivem.

Panoptické barvení dle Pappenheima

Celý nátěr na 3 minuty pokryjeme May-Grünwaldovým barvivem.

Opatrně přikapáváme destilovanou vodu tak, aby se původní barvivo nesmylo. Cílem je nechat působit takto naředěné barvivo (1:1) další 1 minutu.

Barvivo slijeme, můžeme opláchnout vodou.

Na nátěr naneseme Giemsa-Romanowského barvivo. Toto barvivo musí být před barvením vždy čerstvě naředěné přibližně 1:9 (na 10 ml destilované vody 10 - 15 kapek barviva) a necháme působit přibližně 15 minut (10 - 20 minut).

Barvivo slijeme a důkladně opláchneme pod tekoucí vodou.

Spodní stranu sklíčka očistíme utěrkou.

Je vhodné ihned zkontrolovat probarvenost krevních buněk a eventuelně preparát ještě dobarvit.