Prvoci

Senný nálev

druh kultury používaný v biologii k pěstování především prvoků (Protozoa)

Zejména nálevníci, ale i jiní prvoci tvoří cysty.

Zapouzdřený prvok čeká na vhodné podmínky, kde ožije

Použijeme rostliny nebo půdu, dáme do sklenice, směs se poté zalije jakoukoli vodou z přírodního zdroje – kaluž, rybník ne chlorovanou a dáme ji na světlé a teplé místo. 

Asi za 4 dny začne nálev zahnívat a za týden se objeví prvoci. Nálev vydrží 3-5 týdnů. Je tam dobré přidat na špičku nože mouku – potrava pro baktérie, kterými se prvoci živí.

Líný člověk, se vydá hledat vhodnou kaluž a sebere blanku – mezogleu, kde už prvoci jsou a nemusí čekat.

Poté, co nálev necháme dostatečně dlouho odstát, můžeme pipetou, nebo kapátkem nabrat vodu a kapku umístit na podložní sklíčko a i v jednoduchém světelném mikroskopu sledovat živé nálevníky. 

1) Pozorování a barvení živých prvoků z nálevu

Postup:

 na podložní sklo dejte kapku nálevu a přikryjte (pro zvolnění rychlosti pohybu prvoků poslouží vata)

 vedle krycího sklíčka kápněte: 

kapku inkoustu - je vidět cytostom (buněčná ústa) a trichocysty (váčky s toxinem umístěné pod pelikulou rovnoměrně  - slouží jako obrana a k lovu – explozivní cysty – při podráždění vystřelí rosol a ten ztuhne a vytvoří bodec)

kapku tuše - je vidět plnící se potravní vakuola.

2/ Barvení nálevníků po usmrcení

 na podložní sklo dejte po kapce nálevu, usmrťte kapkou Lugolova roztoku (3-6 minut), přikryjte krycím sklíčkem

 vedle krycího sklíčka z jedné strany kápněte kapku modrého inkoustu, obarví se jádro (makronukleus)

 z druhé strany přikápněte kapku červeného inkoustu, obarví se cytoplazma.

Lugolův roztok (též Lugolovo činidlo) je roztok elementárního jodu a jodidu draselného ve vodě. Je nazván podle francouzského lékaře J. G. A. Lugola, který tento roztok v roce 1829 připravil. Lugolův roztok se používá jako antiseptikum a dezinficiens, pro nouzovou dezinfekci pitné vody a jako reagencium pro detekci škrobu v rutinních laboratorních a lékařských testech.

Lugolův roztok se skládá z 5 g jodu (I2) a 10 g jodidu draselného (KI) smíšených s 85 ml destilované vody. Vzniká hnědý roztok s celkovým obsahem jodu 130 mg/ml. Nebo 10 g jodu, 25 g jodidu draselného a 965 g vody. Nelze to zaměňovat s jednoduchými roztoky jodové tinktury.

Tento roztok lze použít jako indikátor - přítomnost škrobů v organických vzorcích, které reagují s tmavě modrým až černým zabarvením. Lugolův roztok nedokáže detekovat jednoduché cukry, například glukózu nebo fruktózu. Využívá se např. i v pivovarnictví, při kontrole zcukření. V průběhu rmutování se obsah škrobu snižuje a jodová zkouška mění svou barvu z černé přes fialovou, hnědou až v podstatě přestane barevně reagovat, což značí dokončené zcukření škrobu.

Lugolův roztok lze použít k barvení buněk, aby bylo jejich jádro lépe viditelné, a také pro uchovávání preparátů fytoplanktonu.

Při kolposkopii lze Lugolův roztok aplikovat do vaginy a na děložní hrdlo. Normální vaginální tkáň se barví hnědě, vzhledem k vysokému obsahu škrobů, kdežto tkáň podezřelá z nádorových změn se nezbarví a proto se oproti okolní tkáni jeví světlá. Lze pak provést biopsii podezřelé tkáně. Metodě se říká Schillerův test.

Lugolův roztok lze také použít při různých experimentech k pozorování, jak na buněčných membránách probíhá osmóza a difuze.

Roztok je také oxidačním antiseptikem, je však nevhodný v tom, že může způsobovat jizvy nebo dočasně odbarvit kůži. Jedním ze způsobů, jak těmto účinkům předejít, je opláchnout později roztok 70% ethanolem.

Lugolův roztok se používá i pro mořská akvária. Je silným zdrojem volného jodu a jodidu pro skalní vegetaci a makroskopické řasy. 

Lugolův roztok lze použít i k léčbě hyperthyroidismu (zbytnění štítné žlázy).

Lugolův roztok se také využívá ve fotografii k lokálnímu bělení pozitivů.

¨

1. Pozorování pohybu nálevníků - dnes nálevníci Oxytricha 

Postup: Na podložní sklo kápněte kapku s nálevníky z povrchové blanky senného nálevu nebo z kultury. Pozorujte a popište způsoby pohybu nálevníků.

 2. Pozorujte pohyb brv

a) Postup: Na podložním skle zpomalte pohyb nálevníků přidáním několika vláken vaty nebo kapky želatiny. Popište a zakreslete pohyb brv (všimněte si pohybu organického detritu v okolí nálevníka).

b) Postup: Na podložní sklo dejte kapku kultury s nálevníky, vedle dejte kapku opálové modři a rozetřete. Opálová modř ze usadí na povrchu nálevníků, kteří zůstanou bezbarví. Zřetelně vystoupí struktura povrchu, potravní a stažitelné vakuoly a neobarvené brvy se zřetelně rýsují na povrchu těla.

 3. Pozorujte pohyb potravních vakuol a chemických změn, které v nich probíhají.

Postup: Na podložní sklo umístěte vedle kapky s nálevníky kapku neutrální červeně. Po několika minutách po přikrytí krycím sklem pozorujte pod mikroskopem zbarvení potravních vakuol a jeho změny. Proveďte totéž s kongo červení. Výsledky zapište a vysvětlete (v kys. prostředí je neutrální červeň malinově červená, v alkalickém žlutočervená, kongo červeň je v kys. prostředí modrá, v neutrálním a alkalickém červená)

4. Pozorujte makronukleus

Postup: Ke kapce s nálevníky přikryté krycím sklem přidejte ze strany acetokarmín a vsajte barvivo pomocí filtračního papíru pod krycí sklo. Pozorujte, popište a nakreslete.

5. Pozorujte přijímání potravy.

Postup: Na podložní sklo dejte kapku s nálevníky a přidejte nepatrné množství práškového karmínu. Přikryjte krycím sklem. Po určité době pozorujte, popište a nakreslete pohyb zrnek barviva v okolí trepek a náplň potravních vakuol.

6. Dokažte glykogen v entoplazmě.

Postup: Ke kapce s nálevníky přikryté krycím sklem přidejte ze strany kapku Lugolova roztoku a vsajte barvivo pomocí filtračního papíru pod krycí sklo. Pozorujte, popište a nakreslete.

7. Pozorujte změny rychlosti pohybu nálevníků

Postup: Na podložní sklo dejte kapku s nálevníky a přidejte kapku ledové vody. Pozorujte rychlost pohybu nálevníků. Na druhém skle ke kapce přidejte kapku teplé vody. Pozorujte, popište a nakreslete.

8. Pozitivní a negativní termotaxe trepky

Postup: Na podložní sklo dejte kapku s nálevníky, přikryjte krycím sklem, položte na černý papír a pozorujte pouhým okem nebo při malém zvětšení v mikroskopu. Do středu zorného pole dejte pinzetou kousek ledu.

9. Pozitivní a negativní chemotaxe nálevníků

Postup: Na podložní sklo dejte na pravou stranu skla kapku s nálevníky a do vzdálenosti 5 mm dejte kapku čisté vody z vodovodu. Preparační jehlou vytvořte spojovací můstek mezi oběma kapkami. Pozorujte při nejmenším zvětšení, krycí sklo nepřikládejte. Potom dejte do kapky s nálevníky krystalek chloridu sodného.

10. Chemotaxe s vystřelováním trichocyst

Postup: Na podložní sklo dejte kapku s nálevníky a přikryjte krycím sklem. Ze strany přidejte malé množství 0,1% roztoku NaOH. Roztok vsajte pod sklíčko pomocí filtračního papíru a pozorujte chování trepek. Totéž opakujte s roztokem anilínové modři nebo roztokem 0,2% kyseliny octové.

11. Tigmotaxe

Postup: Na podložní sklo dejte kapku s nálevníky, do které vložíte několik vláken skleněné vaty a několik vláken z filtračního papíru.